動(dòng)物細(xì)胞勻漿后,其成分大致可分為:一是完整的的細(xì)胞器,包括細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、微粒體和分泌顆粒。二是膜相系統(tǒng),包括細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)膜和高爾基體等。在等滲介質(zhì)中用勻漿器對(duì)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行勻漿,通過(guò)立式高速冷凍離心機(jī)差速離心,各步沉淀中包含著不同的勻漿成分。分離過(guò)程如下:
次離心:用50mL尖底塑料離心管,在立式高速冷凍離心機(jī)中,1000g,離心10min。
第二次離心:次離心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯離心管,3000g,離心10min。
第三次離心:第二次離心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯離心管,6000g,離心10min。
第四次離心:第三次離心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯離心管,10000g,離心10min。
第五次離心:第四次離心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯離心管,20000g,離心10min。
第六次離心:第五次離心后得到的上清液,用50mL聚碳酸酯離心管,100000g,離心10min。
離心過(guò)程中,樣品體積大,沉降路徑長(zhǎng),要相應(yīng)增加離心轉(zhuǎn)速或延長(zhǎng)離心時(shí)間。樣品體積小,靠近離心管底部受到的離心力大,要相應(yīng)降低離心轉(zhuǎn)速或縮短離心時(shí)間??捎肒值近似確定離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間。
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